STEM-Rus

Корпорация Герон (США) – ведущая биотехнологическая компания, изучающая терапевтический потенциал эмбриональных стволовых клеток человека (ЭСКч), сообщила о планах начать предварительное исследование по оценке безопасности трансплантации клеток, производных от ЭСКч, 8-10 пациентам с травмой на грудном уровне Т3-Т10 в течение 7-14 дней включения в исследование.

До трансплантации в клетках будет вызвана дифференциация на олигодендроцитные прогениторные клетки (ОПК), которые, как описано во введении о стволовых клеток, могут развиться в олигодендроциты, нейрональные поддерживающие клетки, выделяющие миелин. По сути, миелин изолирует нейрон, который контролирует поток ионов, проводящий сигналы в клетку и из нее. После травмы, многие нейроны остаются неповрежденными, но теряют изолирующую миелиновую оболочку и становятся нефункциональными. Цель подхода компании Герон заключается в восстановлении функции путем ремиелинизации и подключения этих нейронов.

Клетки будут вводиться в область повреждения позвоночника. Чтобы избежать потенциального иммунологического отторжения трансплантированных клеток, пациенты в течение нескольких месяцев будут принимать специализированные препараты против отторжения, что само по себе, по мнению ряда экспертов, создает дополнительный риск во время такой деликатной фазы восстановления. Хотя первичным ожидаемым результатом исследования является оценка безопасности, функциональные улучшения в нижних конечностях и туловище также будут оцениваться.

После первоначального сообщения об исследовании, американское Управление по надзору за качеством продуктов питания и лекарственных средств (FDA) заблокировало его проведение, так как экспериментальные данные, полученные на крысах, позволяют предположить, что трансплантация клеток приводит к формированию микрокист в спинном мозге. В настоящее время корпорация Герон разрабатывает методы для определения клеток, вызывающих микрокисты, чтобы их можно было отделить от трансплантируемых клеток. Реализовав это, компания намерена перейти к осуществлению 1 фазы клинического исследования на людях. FDA отменило свое регламентирующее ограничение в июле 2010 года.

Предложенное исследование основано на экспериментах на животных, выполненных д-ром Хансом Кирстедом (Dr. Hans Keirstead) и коллегами, которые трансплантировали ОПК, производные от ЭСКч, крысам с контузионной травмой (ушибом), повреждением, наиболее часто встречающимся у человека. Для сравнения эффективности такой трансплантации при острой и хронической травме, крысам вводили 1,5 млн. ОПК через 7 дней и через 10 месяцев после травмы (т.е. при острой и хронической стадиях, соответственно). Все животные получали препараты против отторжения (циклоспорин А), за день до трансплантации и далее в течение всего исследования.

В обеих группах крыс трансплантированные клетки выжили, дифференцировались на олигодендроциты и мигрировали на короткие расстояния в спинном мозге. Однако у крыс с острой травмой наблюдалась значительная ремиелинизация и двигательные улучшения, в отличие от крыс с 10-месячной, хронической травмой, которые не продемонстрировали подобного улучшения. По-видимому, формирование рубцовой ткани со временем ингибирует ремиелинизирующий потенциал трансплантированных клеток. Эти результаты объясняют причину, по которой исследование корпорации Герон включает только пациентов с острой, но не хронической травмой.

MEXICO, SOUTH AMERICA

МЕКСИКА, ЮЖНАЯ АМЕРИКА

1) Dr. Tarcisio Barros

Др. Тарсизио Баррос и др. (Бразилия) вводил стволовые клетки, полученные из костного мозга, в спинномозговую артерию рядом с местом повреждения 32 пациентам с клинически полными повреждениями спинного мозга (2-12 лет после травмы). Стволовые клетки изолировались из собственной крови пациента после назначения препарата для стимуляции производства стволовых клеток костным мозгом и их выхода в кровь. После наблюдения в течение 1 года, 18 пациентов продемонстрировали улучшение электрофизиологической проводимости, которая в некоторых случаях привела к функциональному улучшению.

В 2009 году были опубликованы результаты завершенного исследования. В целом исследователи из Университета Сан-Пауло ввели стволовые клетки в спинномозговые артерии 39 пациентам с 2002 по 2004 годы. Из этих пациентов было 28 мужчин и 11 женщин. У шести из них травма была на шейном уровне С2-С4, у восьми – между С5 и Т1 уровнями, и у 25 между Т2 и поясничным уровнем L1. Травмы были вызваны мотоциклетными авариями (24), занятиями спортом (7) и мотоциклетными/воздушными авариями (2). У всех пациентов прошло не менее 2 лет после травмы. Другими словами, у всех была хроническая травма, при которой традиционно не ожидается никакого дополнительного восстановления, и в результате, любые происходящие улучшения, скорее всего, вызваны медицинским вмешательством.

После лечения пациенты наблюдались раз в полгода в течение 2,5 лет, при этом производилась электрофизиологическая оценка нервной проводимости. При этом виде исследования стимулируются нижние конечности, и замеряется любой последующий отклик в головном мозге. Хотя у всех пациентов подобные отклики отсутствовали на начало лечения, после него они были зарегистрированы у 26 пациентов. В среднем, восстановление нервной проводимости регистрировалось через 9-10 месяцев после лечения.

2) Dr. Gustavo Moviglia et al (Argentina)

Д-р Густаво Мовилья и др. (Аргентина) пролечил двух человек мезенхимальными стволовыми клетками, трансформированными в нейральные стволовые клетки при культивации с аутоиммунными клетками, полученными у пациента.

В этой программе, мезенхимальные стволовые клетки были получены из костного мозга подвздошной кости пациента, т.е. из того места, где сконцентрировано большое количество костного мозга. Стволовые клетки, называемые мастерами на все руки, обладают потенциалом дифференцироваться на различные типы клеток. После дальнейшей очистки, эти стволовые клетки были трансформированы в нейральные стволовые клетки при помощи совместного культивирования с аутоиммунными клетками, ранее изолированными у пациента. Поскольку все клетки взяты у самого пациента (т.е. аутологичные), возможность отторжения отсутствует.

До трансплантации стволовых клеток, ранее изолированные аутоиммунные клетки внутривенно вводились пациенту. Эти инфузии примировали место повреждения, вызвав воспалительную реакцию, создавая более восприимчивую окружающую микросреду для вводимых стволовых клеток. Через два дня, обработанные мезенхимальные/нейрональные стволовые клетки вводились в артерию, обслуживающую область места повреждения.

Первым пациентом был 19-летний мужчина, получивший травму на уровне Т9 в автоаварии за 8 месяцев до начала лечения. Ему сделали два введения стволовых клеток, с интервалом в три месяца. Электрофизиологические исследования показали улучшение проводимости нервных окончаний через место повреждения, МРТ показало увеличение диаметра спинного мозга. После повторного введения координация движений и способность ходить улучшились. Согласно докладам, пациент восстановил функции до уровня S1.

Вторым пациентом была 21-летняя женщина с травмой на шейном уровне C3-5, полученной в автомобильной аварии за 30 месяцев до начала лечения. После одной процедуры, и МРТ и электрофизиологическое исследование показали наличие улучшения, а пациентка восстановила силу и контроль в верхней части тела, включая функции рук. По имеющимся данным, она восстановила функции до уровня Т1-Т2.

Основываясь на этом исследовании, Мовилья и коллеги сообщили о результатах лечения 8 пациентов с хронической полной травмой тремя различными клеточными методами. Хотя детали отрывочны, процесс кажется схожим с тем, что описаны выше, помимо применения дополнительной подготовительной клеточной терапии.

Во-первых, для усиления крайне важного роста и развития новых кровеносных сосудов (ангиогенеза) в месте повреждения, стволовые клетки, полученные из костного мозга и способствующие ангиогенезу, вводились через артерию, снабжающую этот регион. Во-вторых, спустя 18 дней иммунные клетки, специфические для спинного мозга, вводились пациентам, для того, чтобы открыть гематоэнцефалический барьер и создать микроокружение, более подходящее для имплантации восстановительных стволовых клеток. В-третьих, аутологичные (т.е. взятые у пациента) нейральные стволовые клетки были введены в артерию, снабжающую область травмы. За этими клеточными трансплантациями следовала программа нейрореабилитации, направленная на максимизацию функционального восстановления.

После лечения пять пациентов прогрессировали с уровня ASIA-A (полная травма) до ASIA-D (неполная – см. глоссарий) и восстановили способность стоять и ходить в различной степени. У двоих других пациентов отмечались двигательные и чувствительные улучшения. Один пациент не оценивался. Серьезные побочные эффекты не отмечались.

3) Dr. Luis Geffner (Ecuador)

Д-р Луис Джеффнер (Эквадор) и коллеги на 13 ежегодной встрече Международного Общества Клеточной Терапии доложили о лечении 25 пациентов стволовыми клетками, полученными из собственного костного мозга пациентов (т.е. аутологичными). Период от получения травмы до лечения составил от 0,5 месяца до 22 лет (в среднем 4 года).

Пациентам имплантировалось около 1,2 миллионов стволовых клеток на килограмм массы тела, и через 4-7 дней было начата длительная реабилитация. Прогресс оценивался различными методами, включая электрофизиологические методы оценки нервной проводимости, МРТ, оценки функционирования мочевыделительной системы, оценки спастики, способности ходить, а также производилась оценка по шкале ASIA. По словам исследователей: «Пациенты продемонстрировали улучшение чувствительности, функции дефекации и мочеиспускания, и даже контроля сфинктера, эрекции и эякуляции. Пятнадцать пациентов (60%) стали стоять, 10 (40%) ходить с ортезами в упоре на брусьях, и 4 (16%) смогли ходить с костылями». Хотя не очень понятно, как сравнивать эти данные с функциями до лечения, показатели ASIA значительно улучшились после вмешательства. Побочные эффекты отсутствовали, ни один пациент не ощутил ухудшения от лечения.

В 2008 году Джеффнер и другие сообщили о том, что в целом аутологичными стволовыми клетками костного мозга, изолированными из подвздошной кости (самой крупной кости таза), было пролечено 52 пациента с ТСМ. Исследователи отдельно сообщают о восьми случаях (из них 7 мужчин), которые находились под наблюдением дольше всех. У четырех пациентов были острые травмы – 5 дней, 13 дней, 1, 5 месяцев и 7 месяцев на начало лечение, а у четырех – хронические травмы, полученные 6, 6, 7 лет и 22 года до начала лечения. Уровень травмы варьировался от грудного Т4 до Т12,и причиной травмы было огнестрельное ранение (4), падение (3) и автомобильная авария (1).

До трансплантации пациентам проводилась ламинэктомия, чтобы освободить спинной мозг и удалялась рубцовая ткань. Суммарно каждому пациенту было введено 90 миллионов клеток. Чтобы увеличить вероятность того, что клетки достигнут своей цели, клетки вводились тремя разными способами, а именно: 1) 20 миллилитров клеточной суспензии вводили в многочисленные точки в месте повреждения и вокруг; 2) после ушивания твердой мозговой оболочки, окружающей поврежденный спинной мозг еще 30 миллилитров вводились в спинномозговой канал; и 3) еще 30 миллилитров вводились внутривенно.

Пациенты оценивались на начало лечения, и через 6 месяцев, 1 год и 2 года после лечения при помощи различных методов, включая общепринятые шкалы ASIA или Франкеля, оценку спастичности, качества жизни, функции мочевыводящих путей и МРТ. Восстановление некоторых функций в различной степени отмечалось у всех пациентов, даже у четырех пациентов с хронической травмой, для которых функциональное восстановление считается несвойственным.

Исследователи акцентируют внимание на потенциальной важности особых свойств этих стволовых клеток, способствующих ангиогенезу. Они предполагают, что улучшение кровоснабжения и снабжения кислородом в области повреждения могло способствовать функциональному улучшению, наблюдаемому у этих пациентов.

4) Dr. Fernando Callera’s team (Brazil)

Команда д-ра Фернандо Каллера (Бразилия) оценила безопасность введения стволовых клеток костного мозга, полученных у пациентов, через люмбальную пункцию на примере 10 пациентов. У семи из них наблюдалась параплегия, у троих – тетраплегия; средний возраст пациентов составил 24 года, среднее время после травмы – 3 года. Для стимуляции производства стволовых клеток костным мозгом пациенты получали гранулоцитарный-моноцитарный колониестимулирующий фактор (ГМКСФ) в течение 5 дней. На шестой день из подвздошной кости забиралось 100 мл аспирата ткани костного мозга и из него выделялись стволовые клетки. Через 4 часа после забора, примерно 100 млн. клеток трансплантировалось пациентам посредством люмбальной пункции. После наблюдения в течение 12 недель исследователи пришли к выводу, что «процедура является выполнимой, безопасной и хорошо переносится».

5) Dr. Emilio Jacques (Mexico)

Д-р Эмилио Жак (Мексика) занимался трансплантацией стволовых клеток пуповинной крови в место повреждения. Исходя из имеющейся, достаточно скудной информации, процедуры Жака, по-видимому, включали в себя удаление рубцовой ткани лазером, декомпрессию спинного мозга, введение стволовых клеток в область повреждения и размещение жировой ткани, полученной у пациента, поверх места повреждения, чтобы минимизировать формирование рубцовой ткани. После процедуры в близлежащие мускулы ежемесячно вводились стволовые клетки. Согласно источникам, Жак также занимался трансплантацией эмбриональных стволовых клеток.

Один пациент с повреждением на уровне Т5-9, полтора года между травмой и лечением, рассказал нам о некоторых функциональных улучшениях, наступивших примерно три месяца после операции. А именно, граница поверхностной чувствительности спустилась на 5 см ниже уровня Т9, а граница глубокой чувствительности спустилась ниже до линии талии. Более того, он смог самостоятельно крутить педали велосипеда более 30 минут, двигать бедрами, толкать 11кг ногами и выбрасывать ноги вперед в снаряжении на тредмилле.

Процедуры со стволовыми клетками, производимые Жаком, были представлены в докладе на Международном Конгрессе Хирургов в 2005 году в Акапулько, Мексика. Согласно представленной информации он имплантировал неопределенные стволовые клетки «точно в зону повреждения спинного мозга, в сочетании с послеоперационным применением нейромышечной реабилитации, электроакупунктуры, инфракрасного лазера и 4АР» (препарат, улучшающий проводимость).

Из 59 пациентов (средний возраст 21), 51% составили мужчины, 49% - женщины; у 50 был неполный функциональный перерыв, у 9 – полный; 52% - травма на шейном уровне, 38% - на грудном и 10% - на поясничном уровне. Жак сообщил, что у 68% произошло улучшение чувствительности и моторики, а 16% остались на прежнем уровне. «Наилучшие результаты наблюдались у пациентов с более низким уровнем повреждения, в более молодом возрасте и с наименьшим временным периодом после травмы».

6) Medra, Inc

Медра, Инк. представили программу лечения большого спектра неврологических и других заболеваний, включая ТСМ, с помощью фетальных стволовых клеток. Хотя головной офис компании находится в Калифорнии, операции выполняются в Доминиканской Республике. Существует несколько процедур для ТСМ. Полученные из отобранного, 8-12 недельного абортивного материала, фетальные гемопоэтические клетки, по-видимому, вводятся внутривенно, а фетальные нейрональные стволовые клетки – подкожно в лимфатические узлы. В программе утверждается, что клетки будут мигрировать к тем зонам, где они необходимы, а также выделять факторы роста, необходимые для восстановления функций.

EUROPE

ЕВРОПА

1) Dr. Eva Sykova and colleagues (Czech Republic)

Д-р Ева Сыкова и коллеги (Республика Чехия) произвели имплантацию аутологичных стволовых клеток костного мозга, собранных из подвздошной кости, 20 пациентам. У восьми травма была подострая, они получили лечение в течение 10-33 дней после травмы; у 12 травма была хроническая, получили лечение 2-18 месяцев после травмы. Вскоре после забора, около 150 миллиона клеток вводили пациентам через позвоночную артерию или внутривенно. Пациенты с подострой травмой: четверо получали клетки обоими способами; хронические больные: двое получили клетки через артерию, десять – внутривенно. Динамику восстановления у пациентов периодически оценивали различными электрофизиологическими методами и шкалой ASIA. Прогресс был отмечен 1) у всех пациентов с подострой травмой, получавших клетки через позвоночную артерию, и только у одного пациента, получившего клетки внутривенно, и 2) у одного из двух хронических больных, получивших клетки через позвоночную артерию. Среди пациентов, показавших улучшение по результатам шкалы ASIA, многие перешли из группы А в группу В, и один пациент из группы В в D (группа А соответствует максимальной степени паралича, Е – полное выздоровление). Хотя Сыкова очень осторожна в интерпретации этих предварительных результатов, она считает, что данный метод приносит больше результатов при применении непосредственно после травмы и при введении через позвоночную артерию, что позволяет ввести клетки ближе к месту повреждения.

Согласно данным на 2009 количество пациентов, пролеченных этими методами, выросло до 36.

2) Dr. Cornelis Kleinbloesem

Д-р Корнелис Кляйнблозем создал компанию, занимающуюся стволовыми клетками «Селлз фор Хелс» (Cells4Health, или C4H). Головной офис компании находится в Нидерландах, но в компании изначально использовались турецкие больницы и персонал. Программа C4H занимается сбором клеток костного мозга у пациентов посредством пункции подвздошной кости, где сконцентрировано большое количество костного мозга. Затем клетки костного мозга подвергаются обработке запатентованным методом.

Далее клетки вводятся в спинной мозг в области повреждения при помощи 20-40 микроуколов. В целом, ниже, выше и вокруг места повреждения инсулиновым шприцем водится около двух миллилитров препарата стволовых клеток, что соответствует 10-20 миллионам клеток. Позднее в других случаях, клетки также вводились интратекально (в канал спинного мозга) или внутривенно.

По меньшей мере, 18 пациентов с ТСМ были пролечены по данной программе C4H. Из первых девяти пролеченных больных с хронической ТСМ, восемь показали хорошие результаты. У трех из первых четырех пролеченных, результаты МРТ показали, что размер повреждения сократился вполовину спустя три месяца после операции, что предполагает создание новых нейральных клеток и поддерживающих структур.

Предположительно, трансплантация клеток восстановила ряд функций и чувствительность у трех из четырех первых пациентов. Согласно утверждениям ученых, через два-три месяца после трансплантации первый пациент с полным повреждением на Т6 уровне, полученным в автоаварии четыре года назад, восстановил функции до уровня T12- L1, и способен двигать ногами, пройти несколько шагов с ходунками и стоять. Второй пациент, с полным повреждением на уровне C5-6, полученным 6 месяцев назад, через полтора месяца после операции смог двигать ногами, пальцами рук, смог ощущать пальцы ног и восстановил ректальную чувствительность и чувствительность мочевого пузыря. Через несколько месяцев после трансплантации, третий пациент, с полной ТСМ, полученной 9 месяцев назад в результате хирургического осложнения, восстановил способность стоять, ходить на ходунках в ортезах и писáть. Также у этого пациента чувствительность приблизилась к норме, и он восстановил ректальные функции. У четвертого пациента прогресс отсутствовал, возможно, из-за того, что, как оказалось, у больного был полный физиологический перерыв спинного мозга, а не компрессия.

Основные результаты исследования были опубликованы C4H. Независимые источники описывают менее перспективную ситуацию, согласно которой многие пациенты не только не восстановили, но и потеряли некоторые функции.

Недавно Кляйнблозем и коллеги основали клинику XCell-Center, находящуюся в Германии, где проводится множество схожих процедур для ряда заболеваний, включая ТСМ. Костный мозг с большим количеством клеток получается из кости бедра пациента, стволовые клетки костного мозга подвергаются обработке и трансплантируются в поврежденный спинной мозг пациента после ламинэкомии или с помощью менее инвазивной люмбальной пункции в спинномозговую жидкость.

Согласно данным Xcell-Center о наблюдении 162 пациентов с ТСМ (март 2010), примерно 57% сообщили об улучшениях после трансплантации стволовых клеток через люмбальную пункцию. Из этих пациентов ~38%, 36% и 30% сообщили об улучшении мочеиспускания, дефекации и сексуальных функций, соответственно; а 53% и 51% сообщили о снижении нейрогенных болей и мышечной спастичности, соответственно. У 46 пациентов, которым была выполнена двигательная и чувствительная оценка по шкале ASIA до лечения и после лечения, средние двигательные показатели увеличились на 6 пунктов, а средние показатели чувствительности на 11 пунктов.

3) Dr. Venceslav Bussarsky et al (Bulgaria)

Д-р Венцеслав Буссарский и др. (Болгария) пролечил 113 пациентов с хронической ТСМ аутологичными стволовыми клетками и факторами роста, изолированными из костного мозга пациента. Возраст пациентов варьировался от 18 до 65 лет (в среднем 43). Пациентам вводилось приблизительно 40 миллионов клеток в пространство вокруг спинного мозга. Процедура повторялась через 9 месяцев. Перед лечением и три месяца спустя пациентам проводились различные МРТ, неврологические и психологические тесты. Хотя в исследовании не хватало контрольной группы для сравнения, улучшения двигательной функции и чувствительности были отмечены у 105 пациентов.

4) Dr. Robert Trossel (Netherlands)

Др. Роберт Троссель (Нидерланды) лечил пациентов с ТСМ стволовыми клетками пуповинной крови. Хотя подробностей известно немного, одна из статей, представленных в прессе, вкратце описала лечение у Тросселя женщины с высоким уровнем повреждения. В этом случае 1,5 миллиона стволовых клеток были введены женщине внутривенно в основание черепа, где и была у нее травма, и ниже в пять других областей по сторонам шеи. Метод лечения Тросселя вызвал полемику.

АЗИЯ - РОССИЯ

1) Dr. Andrey Bryukhovetskiy (Russia)

Др. Андрей Брюховецкий (Россия), бывший директор отделения неврологии Российского Военно-Морского флота, занимался трансплантацией, как эмбриональных/фетальных стволовых клеток, так и аутологичных (т.е. собственных клеток пациентов) взрослых стволовых клеток пациентам с хронической ТСМ. Кроме того, ряду пациентов Брюховецкий проводил трансплантацию аутологичных клеток обонятельной выстилки носа (КОВ), с использованием процедур, разработанных британским ученым, д-ром Джеффри Райзманом. Хотя КОВ и не являются стволовыми клетками, однако, обладают значительным регенеративным потенциалом, и находятся в фокусе внимания ученых, изучающих ТСМ.

Брюховецкий больше не применяет эмбриональные/фетальные стволовые клетки из-за этической неоднозначности вопроса об их использовании, возможности отторжения и, что важнее всего, его веры, в большую эффективность аутологичных, взрослых стволовых клеток.

Процедуры по клеточной трансплантации, проводимые Брюховецким, можно разделить на следующие категории:

Фетальные клетки: В 1996 году Министерство Здравоохранения России разрешило Брюховецкому выполнить ограниченные клинические исследования по ТСМ. В этих исследованиях 17 пациентам с ТСМ были произведены трансплантации стволовых клеток, нейронов и глии, полученных из различных тканей, включая 12-недельный плод человека. Возраст пациентов колебался в пределах 16-52 (в среднем 30) лет, и период между травмой и трансплантацией варьировался от 1 года до 20 (в среднем 5)лет. У шести пациентов был шейный уровень повреждения, у десяти – грудной, и у одного – поясничный. Помимо клеточной трансплантации, все получили набор дополнительных процедур, в зависимости от их повреждения.

До лечения, у 14 пациентов состояние по шкале ASIA соответствовало группе А (меньше функций сохранено), у троих – группе В. После трансплантации (0,5-3 года наблюдения), четыре пациента относились к группе А, пятеро – к группе В и семеро – к С. У пятнадцати наблюдалось улучшение чувствительности, у семи – моторное улучшение, у 12 улучшилась функция мочевого пузыря.

СфероГель и аутологичные клетки: Команда Брюховецкого произвела имплантацию СфероГеля (биодеградируемый полимерный матрикс) с клетками шести пациентам, нуждающимся в реконструктивных оперативных вмешательствах. Трем пациентам были имплантированы гемопоэтические стволовые клетки (клетки, полученные из костного мозга путем выгонки в кровь), трем другим – клетки обонятельной выстилки. За время наблюдения (3-8) месяцев два пациента группы А перешли в группу С, один пациент перешел в группу В. У одного пациента из группы В улучшения отсутствовали.

Интратекальные трансфузии стволовых клеток применяются в настоящий момент чаще всего. В этой относительно прямолинейной процедуре без хирургического вмешательства, стволовые клетки собираются у пациента без анестезии и хранятся с сохранением их жизнеспособности до введения пациентам.

Для стимулирования выделения стволовых клеток и их накопления в крови, пациенты обычно получают восемь подкожных инъекций гранулоцитарного колониестимулирующего фактора, также известного, как нейпоген® или филграстим, в течение 4 дней. На пятый день пациента подключают к сепаратору крови. В течение 3-4 часов кровь забирается из вены, обрабатывается в сепараторе, который изолирует стволовые клетки, и затем вводится через другую вену.

Собранные стволовые клетки концентрируются при помощи центрифуги и медленно замораживаются в жидком азоте (-170⁰ Цельсия) с добавлением диметилсульфоксида (ДМСО), криоконсервирующего вещества, позволяющего заморозить клетки с минимальными потерями их свойств. Также проверяется наличие инфекций, чтобы избежать их попадания во время трансфузии за защитный гематоэнцефалический барьер.

Перед трансфузией суспензия стволовых клеток оттаивается, и, примерно, 5,3 миллиона клеток вводится интратекально в субарахноидальное пространство (т.е. в спинномозговую жидкость) посредством люмбальной пункции на уровне L3-4 с использованием местной анестезии. Процедура занимает немного времени и довольно проста. Повторно клетки можно будет вводить через два месяца. Брюховецкий считает, что большое число трансфузий способствует функциональному восстановлению.

При интратекальных трансфузиях клеток обонятельной выстилки, изолированных из назальной ткани пациента и прокультивированных, заметных положительных результатов получено не было, в отличие от трансфузий гемопоэтических стволовых клеток.

Хотя в клинике Брюховецкого на момент написания данного материала клетки были собраны примерно у 120 человек, только около 60 человек, по различными причинам, включая наличие латентных инфекций, получили трансфузии клеток. Из этих 60 человек, 18 получили несколько трансфузий, согласно рекомендациям. В свою очередь, из 18 человек, 61% продемонстрировали функциональное восстановление, в отдельных случаях, очень значительное.

Поскольку большая часть пациентов получили трансфузии сравнительно недавно, оценка долгосрочного эффекта была преждевременной. Улучшения, наступившие быстро, скорее всего, вызваны не сравнительно медленной регенерацией нейронов или процессом ремиелинизации, а изменением окружающей среды места повреждения под воздействием секреции факторов роста и других молекул.

2) Dr. Samuil Rabinovich and colleagues (Russia)

Д-р Самуил Рабинович и коллеги (Россия) занимались трансплантацией различных комбинаций фетальных КОВ, клеток нервной и гемапоэтической тканей, и фрагментами спинного мозга в место повреждения 15 пациентам. Возраст пациентов колебался от 18 до 52 лет, период после травмы – от одного месяца до шести лет. У всех полный перерыв группы А согласно классификации Франкеля (которая к сегодняшнему дню включена в шкалу ASIA). Каждый из пациентов получил от одной до четырех трансплантаций клеток в разное время, и наблюдался в течение, по крайней мере, 1,5 лет. Улучшения были отмечены у 11 из 15 пациентов. Шесть пациентов перешли в группу С (неполный перерыв), пять обрели способность ходить с костылями. В целом, у пациентов с меньшим сроком после травмы результаты лучше.

Согласно обновленным данным, опубликованным на вебсайте ученых, 122 пациента подверглись процедуре, в ходе которой место повреждения наполнялось гелем с фетальными стволовыми клетками. Вслед за первоначальной трансплантацией последовали еще одна или более трансплантации клеток в субарахноидальное пространство, под мембрану спинного мозга. Период между травмой и хирургической трансплантацией варьируется от нескольких месяцев до пяти лет.

Исходы этих пациентов представлены в таблице ниже. Как можно увидеть многие пациенты восстановили ряд функций, хотя некоторые из них получили лечение в тот период времени после травмы, когда дополнительное восстановление не является неожиданным.

Неврологический статус согласно определению ASIA до начала лечения	Неврологический статус после лечения
	A	B	C	D
A (73 пациента)	31%	48%	18%	3%
B (49 пациентов)	-	78%	22%	-

3) Dr. Helena Chernykh and colleagues (Russia)

Д-р Елена Черных и коллеги (Россия) трансплантировали аутологичные стволовые клетки костного мозга в спинной мозг 18 пациентов с ТСМ в ходе хирургического вмешательства, направленного на лечение развития кисты в спинном мозге. Порция стволовых клеток, изолированная из костного мозга пациента за день до операции, была введена в полость кисты в ходе операции; остальная часть вводилась внутривенно. Эти пациенты сравнивались с 18 контрольными пациентами с ТСМ, получившими только хирургическое вмешательство. Изменения в моторной функции, чувствительности, способности выполнять повседневные действия, и спастичности оценивались в среднем через 9 месяцев после операции. Значительные улучшения были отмечены у 12 из 18 пациентов, пролеченных стволовыми клетками, и у 5 из 18 контрольных пациентов.

АЗИЯ – КИТАЙ, КОРЕЙ И ЯПОНИЯ

1) Dr. K-S Kang et al (South Korea)

Д-р К-С Канг и др. (Южная Корея) ввел стволовые клетки пуповинной крови (КПК) в область повреждения 37-летней женщине, получившей полное повреждение спинного мозга на грудном уровне 19 лет назад в результате падения. В отличие от эмбриональных аналогов, природа стволовых клеток пуповинной крови не является спорной. Также риск их отторжения значительно меньше, чем у большинства других аллогенных (т.е. полученных у генетически отличных людей) донорских тканей, за исключением эмбриональных, т.е. необходимо некоторое, не обязательно полное, соответствие донора реципиенту.

В данном случае пуповинная кровь человека была получена из банка крови, клетки были изолированы в течение 24 часов, и прокультивированы в среде. Исследователи указали, что при выращивании на нейрогенной среде, клетки проявили характеристики, свойственные нейронам и клеткам нейронной поддержки ( т.е.глиальным).

После ламинеэктомии, один миллилитр, содержащий один миллион клеток, был введен «в субарахноидальное пространство наиболее дистальной части здорового спинного мозга». Дополнительно один миллион клеток был введен «диффузно в интрадуральное и экстрадуральное пространство поврежденного спинного мозга».

Исследователи сообщили, что у пациентки восстановились некоторые функции нижних конечностей в течение 41 дня после трансплантации, включая способность ходить с опорой на ходунки. Различные электрофизиологические исследования подтвердили эти наблюдения. Ученые считают, что введение клеток непосредственно в спинной мозг более эффективно, чем вливание их в жидкость, окружающую спинной мозг. Они также не исключают, что функциональное восстановление произошло благодаря декомпрессии спинного мозга, связанной с оперативным вмешательством.

К сожалению, после второй трансплантации клеток состояние пациентки значительно ухудшилось. На данный момент она не может долго находиться в сидячем положении и большую часть времени проводит в постели. По ее словам, «улучшения быстро исчезли. Я получила повторное лечение, и вот результат. Я не могла двигаться и страдала от сильных болей». Врачи предполагают, что пациентка получила инфекцию во время второй процедуры, либо из-за отдельных аспектов самой процедуры, либо из-за бактериального заражения трансплантируемых клеток. В результате чего, окружающие ткани затвердели.

2) Dr. Yoon Ha et al (South Korea)

Д-р Юн Ха и др. (Южная Корея) трансплантировал клетки костного мозга (ККМ) в место повреждения пациентов с острой ТСМ (7-14 дней после травмы) в сочетании с гранулоцитарно-моноцитарным колониестимулирующим фактором (ГМКСФ), фактором, стимулирующим производство стволовых клеток. Клетки костного мозга были забраны методом аспирации из подвздошной кости (т.е. кости бедра) и обработаны. Поскольку эти аутологичные клетки взяты у самого пациента, вероятность отторжения отсутствует. После ламинэктомии одним позвонком выше и ниже места контузии, было введено 1,8 мл пасты с клетками костного мозга в шесть точек рядом с местом повреждения.

Все пациенты – мужского пола, в возрасте от 17 до 51 года. У пяти пациентов – шейный уровень повреждения, у одного – грудной, все относятся к группе А по шкале ASIA, т.е. полное повреждение. Пятеро получили клетки костного мозга и ГМКСФ, один получил только ГМКСФ.

ГМКСФ вводился подкожно в течение первых пяти дней каждого месяца, пять месяцев. Помимо стимуляции пролиферации стволовых клеток костного мозга, эксперименты на животных позволили предположить, что ГМКСФ может 1) активировать макрофаги (иммунные клетки) для удаления миелинового дебриса, ингибирующего регенерацию аксонов, и 2) ингибировать посттравматическую гибель клеток, именуемую апоптозом.

Хотя улучшения чувствительности были отмечены сразу после процедуры, восстановление чувствительности в области крестца и значительные моторные улучшения наблюдались в последующий период от трех недель до семи месяцев. Четверо пациентов, включая получившего только ГМКСФ, перешли из группы А, полный перерыв, по шкале ASIA, в группу С, неполный перерыв, один перешел из группы А в группу В, один остался в группе А. Результаты МРТ, сделанной в течение 4-6 месяцев после травмы, показали небольшое улучшении

Ученые пришли к выводу, который и является целью исследования, что помимо повышения температуры, вызванной введением ГМКСФ, другие серьезные осложнения при трансплантации ККМ отсутствуют. Поскольку данное вмешательство и последующие оценочные мероприятия проводились относительно вскоре после травмы, когда естественное функциональное улучшение происходит довольно часто, ученые осторожны в своих заключениях относительно общей эффективности метода. Однако, они цитируют исследования, демонстрирующие, что только относительно небольшое количество пациентов (~6%) перешло из группы А шкалы ASIA в группу В.

Позднее ученые сообщили о результатах более экстенсивного исследования, в котором 35 пациентов с полной ТСМ получили трансплантацию аутологичных стволовых клеток костного мозга, сопровождаемую стимулирующим использованием ГМКСФ. Пациенты данного исследования сравнивались с 13 пациентами с ТСМ, получившими более традиционное лечение без трансплантации стволовых клеток. Семнадцать человек получили трансплантацию клеток в течение 14 дней после травмы, шесть – в период от 2 до8 недель, и двенадцать пациентов – спустя 8 недель. В среднем период наблюдения составил 10,4 месяцев. Улучшение было отмечено в 30,4% ранее леченых пациентов (т.е. пациентов в острой и подострой стадии травмы, не в хронической стадии).

3) Dr. Yongfu Zhang and colleagues (China)

Д-р Йонгфу Жанг и коллеги (Китай) произвели трансплантацию аутологичных (т.е. взятых у самого пациента) стволовых клеток костного мозга 90 пациентам с острой и хронической ТСМ. Из этих пациентов, 10 имели шейный уровень травмы, 62 – грудной и 18 – поясничный. Время после травмы варьировалось от 3 дней до 6 лет. «Инъекции делались в область между повреждением и здоровым спинным мозгом, выше и ниже повреждения».

У 33 пациентов улучшилась чувствительность и у 11 – мышечные функции, согласно шкале по Франкелю (на которой основана шкала ASIA). Все пациенты с улучшениями в клинической картине получили травму не позднее, чем за год до процедуры трансплантации. Более раннее начало лечения связывается с более лучшими результатами лечения. Ученые предполагают, что стволовые клетки костного мозга улучшают циркуляцию крови и ингибируют формирование глиального шрама в месте повреждения.

4) Dr. Fukuki Saito et al (Japan)

В 2008 году д-р Фукуки Сайто сообщил о лечении пациента с острой травмой спинного мозга аутологичными стволовыми клетками костного мозга. Через три дня после травмы из подвздошной кости пациента была собрана ткань костного мозга, содержащая стволовые клетки, и затем клетки культивировались в течение 10 дней, и их количество было увеличено. Через 13 дней после травмы, суспензия с 31 млн стволовых клеток в приблизительно 2 мл физиологического раствора была трансплантирована в ликвор путем люмбальной пункции. Улучшения движения и чувствительности были отмечены через один и три месяца после трансплантации. Позднее также наблюдалось небольшое улучшение. Поскольку некоторое улучшение не является неожиданным в этой стадии после травмы, сложно уверенно утверждать, насколько восстановление функции можно приписать стволовым клеткам, или оно произошло спонтанно.

5) Beike Biotechnology Company (China)

Бейке Биотекнолоджи Компани (Китай) была основана в 2005 году и финансируется Университетом Пекина, Университетом Науки и Технологии Гонконга и городом Шэньчжэнь (возле Гонконга), а также грантами Китайского правительства. Компания установила сотрудничество с более чем 60 учеными ведущих китайских университетов. Основываясь на исследовании, начатом десять лет назад, врачи, работающие сейчас на компанию Бейке, пролечили первого пациента в 2001, а через несколько лет количество пациентов с различными патологиями составило несколько сотен. По мере роста доверия, была основана компания Бейке для лечения пациентов стволовыми клетками на коммерческой основе.

К концу 2008 компания пролечила примерно 3900 пациентов в приблизительно 30 клиниках в Китае и одной в Таиланде, около 800 из которых являются гражданами примерно 35 других стран. Более трети пациентов имеют дисфункцию спинного мозга, включая ТСМ (1176), рассеянный склероз (103) и боковой амиотрофический склероз (194), а у 77 пациентов наблюдалась травма головного мозга.

Однако, в техническом смысле слова Бейке не лечит пациентов. Компания поставляет стволовые клетки, полученные в своих 18 лабораториях, сотрудничающим с ней больницам. Эти больницы уполномочены Министерством Здравоохранения Китая на лечение пациентов в клиниках, основанных Бейке. Хотя многие больницы Китая предоставляют лечение стволовыми клетками, компания Бейке является основным источником стволовых клеток для страны. Для большей доступности этих методов лечения, компания Бейке планирует открыть лаборатории и центры лечения в Индии, Европе, на Ближнем Востоке и или в Панаме или в Мексике.

Бейке занимается трансплантацией различных стволовых клеток разными методами. Как правило, компания использует стволовые клетки пуповинной крови, отчасти потому что пуповинная кровь часто собирается после родов Китайскими банками крови. Бейке также трансплантирует стволовые клетки, полученные из костного мозга пациента. Клетки обычно вводятся либо внутривенно, либо путем люмбальной пункции, последний способ позволяет вводить клетки непосредственно в ЦНС. Иногда клетки трансплантируются непосредственно в спинной мозг.

После тестирования на болезни, пуповинная кровь отправляется из банка крови в лабораторию Бейке и тестируется повторно. Стволовые клетки сепарируются от клеток крови и тромбоцитов при помощи центрифугирования, а затем культивируются в среде с факторами роста, для усиления восстановительного потенциала. Среда роста смывается, нужные стволовые клетки остаются. Чтобы гарантировать жизнеспособность все препараты стволовых клеток остаются свежими и не замораживаются для позднейшего использования.

Обычно пациенты получают 4-7 инъекций стволовых клеток в течение 25-35 дней. Этот лечебный режим дополняется индивидуальными реабилитационными программами.

Многие пациенты с ТСМ, пролеченные компанией Бейке, восстановили ряд функций, улучшающих качество жизни, варьирующихся от мелких достижений до очень значительных. Хотя в случаях некоторых заболеваний улучшения могут исчезнуть со временем, восстановление при ТСМ, как правило, стабильно. Согласуясь с более длительными физиологическими механизмами, достижения часто медленно активизируются после лечения стволовых клеток и возвращения домой.

В целом, Бейке предпочитают лечить пациентов с неполной травмой. По словам основателя компании «Бейке», Д-ра Сеана Ху: «Травмы спинного мозга очень интересны, потому что они противоречат правилу «Чем раньше, тем лучше». Мы обнаружили, что один из наших самых лучших результатов достигнут в случае травмы со сроком давности более 20 лет… По нашим наблюдениям отклик на терапию у таких больных лучше, чем у пациентов с травмой не позднее шести месяцев. В результате мы не позволяем госпитализировать больных с травмой, полученной менее шести месяцев назад».

Исследование: Ученые Бейке оценили результаты лечения 500 пациентов стволовыми клетками пуповинной крови (465 закончили исследование). Возраст пациентов колебался от 18 до 65 лет, 78% были мужчины, и у всех травма была получена 1-10 лет до начала лечения (уровень С4-Т10). Пациенты получали по 4-5 интратекальных введений по 10-30 млн. стволовых клеток с интервалом в 1 неделю, а затем находились под наблюдением в течение года, их состояние оценивалось различными методами, включая широко используемую шкалу ASIA для оценки двигательных функций и чувствительности. Статистически значимые, умеренные улучшения, продолжающиеся после последнего введения, были задокументированы. Серьезных побочных эффектов отмечено не было.

С опытом многих пациентов можно ознакомиться на сайте www.stemcellschina.com, включая видео материалы до и после лечения, включая и следующий случай. 30-летний мужчина из Румынии получил неполную травму на шейном уровне С5-С6 в 1995 году в результате ныряния. После трех курсов инъекций стволовых клеток, он написал следующее:

«У меня улучшились движения в руках. Увеличилась сила в руках и в теле, и появились новые ощущения до самых ступней, почти на 90%... Я чувствую свои руки на 100%.»

“Я начал немного двигать пальцами на руках, и чувствую боль в первых двух пальцах. Я также хорошо чувствую тепло в нога и … могу двигать ступнями, но только 1-2 раза. Сейчас у меня могут сокращаться мышцы живота. Я могу с поддержкой и упором в коленях стоять на ногах 30-50 минут. У меня улучшилось равновесие, и когда я стою на ногах, я могу больше двигать руками и телом, потому что мышцы спины и живота стали гораздо сильней».

«Лежа в кровати, я могу немного подвигать ступнями… Я могу удерживать мочу в течение 5-10 минут. У меня значительно улучшилась чувствительность; я лучше чувствую ноги и температуру, а также боль и прикосновения… Равновесие у меня гораздо лучше, чем прежде, я могу сидеть на кровати без поддержки, и если моя мама вытянет мне ноги, я могу вернуть их назад. То есть я начал двигать ногами, хоть и совсем немного, но это уже начало. У меня также начали работать трицепсы».

6) Tiantan Puhua Hospital (China)

Врачи в Клинике Тьантан Пухуа, Пекин, Китай, открыли новый центр для лечения ряда неврологических заболеваний. Стволовые клетки из различных источников трансплантируются пациентам различными методами. Программа центра также включает в себя компонент «само-активизации и пролиферации стволовых клеток», в рамках которого, ежедневно пациентам внутривенно вводится индивидуально подобранная смесь «нейротрофических лекарств». Предполагается, что эта смесь стимулирует дифференциацию собственных стволовых клеток пациента на нервные предшественники и их миграцию к нужному месту. Опыт нескольких пациентов опубликован на сайте центра www.stemcellspuhua.com.

Центр сообщил о трансплантации аутологичных (т.е. изолированных у пациента) стволовых клеток, полученных из костного мозга, шести пациентам с ТСМ, из которых пятеро имели хроническую травму, полученную не меньше одного года назад. Учитывая формирование глиального шрама на месте повреждения, являющегося преградой для регенерирующих нейронов, врачи, удаляют рубец «лекарством» до введения клеток. Клетки выращиваются и размножаются в культуре в течение примерно 3-4 недель. В итоге получается около 4 000 000 клеток, которые затем вводятся больному в спинномозговую жидкость при помощи люмбальной пункции или же имплантируются напрямую в поврежденный спинной мозг хирургическим методом.

ASIA- INDIA & OTHER

АЗИЯ – ИНДИЯ И ДРУГИЕ СТРАНЫ

1) Dr. Geeta Shroff (India)

Д-р Гита Шрофф (Индия) использовала эмбриональные стволовые клетки человека (ЭСК) для лечения сотен больных, включая ТСМ. Достигнуты достаточно значительные результаты, и что особенно важно, если учесть теоретический риск ЭСК, побочные эффекты отсутствовали.

Все клетки, множество раз трансплантировавшиеся многим пациентам, были получены из одного искусственно оплодотворенного яйца из программы Шрофф по оплодотворению in vitro. Яйцо делится с разрешения донора, и затем, как правило, утилизируется. Успех Шрофф в значительной степени облегчается обширным опытом работы с эмбриональными клетками в качестве врача, занимающегося оплодотворением. При осуществлении искусственного оплодотворения она добилась 70% успешных результатов, что является высоким показателем, по сравнению с другими программами. По-видимому, опыт, приобретенный при выращивании здоровых эмбрионов, был успешно переведен в плоскость создания высокоэффективных стволовых клеток. Клетки подготовлены в соответствии со стандартами контроля качества GMP (Good Manufacturing Practice) и GLP (Good Laboratory Practice).

Ключевой момент деятельности Шрофф заключается в том, что она выращивает ЭСК без использования каких-либо продуктов животного происхождения, в том числе питающих клеток животного происхождения, которые используют многие ученые. Полностью сохраняя «человеческую» природу клеток, клетки тем самым становятся более пригодными к трансплантации. Клетки «материнской» культуры дальше адаптируются или примируются для создания дочерних культур, направленных на специфические заболевания. Соответственно, предполагается использовать более специализированные клеточные линии для лечения больных диабетом, ТСМ, инсультом и т.д. По мнению Шрофф, трансплантированные клетки будут направляться именно в ту ткань, где они необходимы. То есть, даже при внутривенном или внутримышечном введении клеток, физиологическое родство клеток с целевой тканью заставит их мигрировать туда, где они нужны.

Согласно Индийским рекомендациям по использованию стволовых клеток, использование ЭСК клеток разрешается, если состояние или заболевание считается неизлечимым, Учитывая черепашью скорость развития методов лечения при помощи стволовых клеток в большинстве стран, данные рекомендации представляются весьма разумными.

В ответ на критику, упрекающую ее в использовании беззащитных и беспомощных пациентов в качестве подопытных кроликов, Шрофф отмечает, что 30% ее пациентов либо сами являются врачами, либо имеют членов семьи с медицинским образованием. Другими словами, высокообразованные медицинские специалисты, которые могут оценить как суть выбранного метода, так и пользу. Кроме того, лечение получили также члены руководства страны, и согласно их комментариям, они довольны достигнутым эффектом. Демонстрируя интерес к ее программе на самом высоком уровне, Шрофф упоминает Президента и премьер-министра Индии. Также, тот факт, что многие из неимущих пациентов были пролечены бесплатно, убедительно доказывает, что ее программа не является лишь коммерческим начинанием.

Шрофф пролечила около 100 пациентов с ТСМ. Хотя она считает, что лечение будет оптимальным, если оно начато вскоре после травмы, у большинства ее пациентов со времени получения травмы прошло не меньше года. Она решила больше не лечить острые травмы из-за того, что критики ее метода лечения будут отрицать достигнутые улучшения, объясняя их естественным прогрессом, который произошел бы в любом случае в течение периода, когда подобное восстановление происходит достаточно часто.

Пациенты, как правило, посещают клинику несколько раз для серии трансплантаций. Клетки вводятся разными способами, включая внутривенный или внутримышечный, интратекальные трансплантации непосредственно в область спинного мозга применяются значительно реже. Количество трансплантируемых клеток со временем возросло. Все пациенты тщательно наблюдаются для документирования прогресса.

Один из наиболее хорошо известных пациентов Шрофф – Аджит Йоги, 60-летний член парламента и бывший главный министр одного из Индийских штатов, получивший травму спинного мозга на шейном уровне в автомобильной аварии в 2004 году. После травмы, Йоги не мог сидеть, дышал и писал с трудом. После лечения он способен пройти 10 шагов в ортезах, значительно восстановил функции мочеиспускания и дефекации, полностью, вплоть до пальцев на ногах восстановилась чувствительность, и он с новой энергией возобновил свой деловой образ жизни политика.

2) Dr. Satish Totey and colleagues (India)

Д-р Сатиш Тоти и коллеги (Индия) стал инициатором пилотного исследования, направленного на оценку эффективности трансплантации собственных (т.е. аутологичных) мезенхимальных стволовых клеток пациента, полученных из костного мозга. Забор клеток осуществлялся из кости бедра, затем перед трансплантацией клетки культивировались в течение нескольких недель. У 22 пациентов, включенных в исследование, была полная травма спинного мозга (ASIA А), на уровнях с С4 по Т10, полученная не позднее, чем за полгода до лечения. Пациентам вводится приблизительно 1 млн. клеток на килограмм массы тела, относительно неинвазивным способом – люмбальная пункция – в спинномозговую жидкость. Чтобы оценить потенциальные изменения проводились различные электрофизиологические, клинические и томографические исследования до трансплантации и через 3 месяца после.

К моменту написания данной работы, в исследование было включено 12 человек, из которых один уже прошел обследование через три месяца после процедуры. Этот пациент, 32-летний мужчина, изначально получил две трансплантации стволовых клеток, между которыми прошло две недели. Помимо улучшений, зарегистрированных разными электрофизиологическими методами, пациент сообщил об улучшении функций дефекации и мочеиспускания, улучшении чувствительности; улучшении мышечных функций и силы, включая движения пальцев ног и некоторое передвижение на ногах, а также общее увеличение сил.

3) Dr. R. Ravi Kumar and colleagues (India)

Д-р Р. Рави Кумар и коллеги (Индия) трансплантировал аутологичные (т.е. полученные у самого пациента) стволовые клетки более 120 пациентам с ТСМ. Препарат стволовых клеток создавался в сотрудничестве с Ничи-Ин Центром Регенеративной Медицины (Nichi-In Center for Regenerative Medicine), японской лабораторией, находящейся в Индии и специализирующейся на препарате аутологичных стволовых клеток. Стволовые клетки экстрагировались из 100 мл костного мозга, полученных у пациентов. Концентрированный препарат, содержащий около 2-4 миллионов клеток, вводился пациентам в спинномозговую жидкость (т.е. интратекально).

Согласно презентациям, представленным на конференциях и встречах в 2007 году, 120 пациентов, получивших трансплантацию клеток указанными методом, находились под наблюдением в течение шести месяцев. Из указанной группы пациентов 85 были мужского пола и 35 женского; возраст варьировался в пределах 8-55 лет; время после травмы – от 3 месяцев до 11 лет. У девяти пациентов повреждение было на шейном уровне, у 38 – на грудном (T1-T7), 60 – нижнегрудном (Т7-Т12) и 12 – на поясничном уровне.

Через шесть месяцев после трансплантации, 12 и 8 пациентов продемонстрировали улучшение моторной силы, сменив уровень на два или на один, соответственно (при этом более выраженный прогресс отмечается при более низких уровнях повреждений); трое смогли ходить самостоятельно; у 14 повысилась чувствительность или уменьшилась боль; и у 18 улучшилась функция мочеиспускания. Серьезные побочные эффекты отсутствовали.

4) Dr. Adeeb Al-Zoubi and colleagues (Jordan)

В 2009 году д-р Адиб Аль-Зуби и коллеги сообщили о своем опыте трансплантации очищенных стволовых клеток восьми пациентам (6 мужчин, и 2 женщины) с полной травмой на грудном уровне. Стволовые клетки изолировались из крови пациента (т.е. аутологичные) после введения гранулоцитарного колониестимулирующего фактора, который стимулирует производство стволовых клеток. В среднем, 51 млн. стволовых клеток имплантируется в кистозную полость или субарахноидальное пространство (пространство между мембранами спинного мозга, заполненное ликвором) в области повреждения. За 9 месяцев наблюдения за пациентами, побочные эффекты отмечены не были. У четырех пациентов наблюдается улучшение чувствительности и у двух – улучшение моторной функции.

В 2010 году, Аль-Зуби представил результаты трансплантаций очищенных стволовых клеток, полученных из костного мозга, сделанных около 50 больным с ТСМ. Эти клетки были изолированы из костного мозга, не из крови, как прежде, и вводились в спинной мозг пациента. Несмотря на некоторые улучшения, ученый считает результаты «условно оптимальными». В связи с этим, Аль-Зуби изучает методы оптимизации подготовки, обработки и дифференцирования этих и других клеток костного мозга на клетки, с более выраженной неврологической направленностью, и, соответственно, с большим потенциалом лечения ТСМ.

5) Dr. Haluk Deda and colleagues (Turkey)

Д-р Халук Деда и коллеги (Турция) произвели трансплантацию аутологичных, стволовых клеток костного мозга девяти пациентам (5 мужчин и 4 женщины) с полной травмой спинного мозга, ASIA-A. Возраст варьируется от 17 до 40, время после травмы – от 2 до 17 лет. У шести пациентов был шейный уровень травмы, у трех – грудной. У пациентов из подвздошного гребня забирается приблизительно 100-150 мл костного мозга со стволовыми клетками, затем аспират отправляется в Мичиган для обработки и очистки стволовых клеток, и возвращается в больницу для трансплантации. Поврежденный спинной мозг подвергается ламинэктомии, также осторожно разрезаются покрывающие мембраны. Фрагменты кости и спайки вокруг места повреждения удаляются. Стволовые клетки имплантируются несколькими методами, включая: 1) множественные инъекции непосредственно в спинной мозг на разную глубину; 2) укрывание спинного мозга гелевой пеной, содержащей стволовые клетки; 3) введение в субарахноидальное пространство (т.е. в пространство со спинномозговой жидкостью) после закрытия мембран; и 4) внутривенное введение. У всех пациентов отмечались функциональные улучшения уже через три недели после процедуры. Через год после трансплантации семь из девяти пациентов перешли из категории А шкалы ASIA (полная травма) в категорию С (неполная травма – частичное восстановление чувствительности и движения), а двое перешли в категорию В (неполная травма – частичное восстановление чувствительности).

6) Dr. Himanshu Bansal (India)

Д-р Химаншу Бансаль (Индия) применяет ряд процедур для восстановления функций после травмы, включая трансплантацию стволовых клеток, и транспозицию сальника. В предварительных исследованиях Бансаль трансплантировал стволовые клетки костного мозга 11 пациентам с полной травмой (т.е. ASIA-A), полученной, по крайней мере, год назад в результате контузии или разрыва. У 9 пациентов была травма шейного отдела, у двоих – грудного, 10 мужчин, одна женщина. Хотя большинство было моложе 30, возраст варьировался от 20 до 52.

Стволовые клетки собираются путем аспирации приблизительно 120 мл костного мозга из подвздошного гребня пациента (тазовая кость, богатая костным мозгом), а затем путем центрифугирования получается концентрат, богатый стволовыми клетками. Чтобы сохранить их природу, а также факторы роста, усиливающие регенерацию, дальнейшей физической, химической или биологической обработки клеток до трансплантации не проводилось.

Ряду пациентов клетки вводились непосредственно в область вокруг повреждения спинного мозга, в других – в интратекальное пространство вокруг спинного мозга. Хотя период наблюдения после трансплантации был ограничен, результаты позволяют предположить, что у 6 пациентов, получивших прямую трансплантацию в спинной мозг, улучшения будут нарастать. Бансаль отмечает, что двое из них продемонстрировали «100% улучшение контроля мочеиспускания, у одного значительно улучшились двигательные показатели, у другого – улучшились координация, способность ходить и чувствительность». У травм с более высоким уровнем он отмечает восстановление контроля туловища и снижение спастичности. Поскольку пять пациентов, получавших стволовые клетки интратекально, не показали значительных улучшений, Бансаль больше не вводит клетки этим методом. Он считает, что интенсивная физическая реабилитация после трансплантации крайне важна для развития функциональных связей в нервной системе.

7) Dr. Sunil Waghmare and colleagues at the Spectrum Cell Clinic (India)

Д-р Сунил Вахмар и коллеги в Спектрум Селл Клиник (Индия) использует для лечения различных заболеваний, включая ТСМ, либо клетки пуповинной крови, либо аутологичные клетки костного мозга. В случае ТСМ клетки имплантируются несколькими методами, включая 1) через кровеносный сосуд, снабжающий переднюю область спинного мозга (передняя спинномозговая артерия), 2) интратекально через пространство вокруг спинного мозга, и 3) непосредственно в область травмы. В целом, клиника предпочитает использовать менее инвазивные методы с использованием местного обезболивания.

На текущий момент, клиника пролечила около 30 пациентов с разной тяжестью травмы, согласно определению шкалы ASIA (см. приложение). Вахмар отмечает, что в случае неполных травм, терапевтический отклик составляет ~75-80% и наблюдаются улучшения на более, чем два уровня по шкале ASIA. При полных травмах лечение часто приводит к улучшению на один уровень. В клинике зарегистрирован единичный случай, описанный также на их веб-сайте, когда 42-летний мужчина, получивший 13 лет назад неполную травму на шейном уровне C5-C6, сообщил о значительном функциональном улучшении после трехкратного введения стволовых клеток, а именно: 1) восстановление контроля дефекации и мочеиспускания, 2) увеличение мышечной массы и улучшение координации, и 3) сокращение спастичности.

OTHER

ПРОЧИЕ

1) Advanced Cell Therapeutics (ACT)

«Адвансд Селл Терапьютикс» (ACT). Согласно информации на их Интернет сайте, компания АСТ, зарегистрированная в Карибском островном государстве Тёркс и Кайкос, имеющая связи в Южной Африке, предоставляет доступ к терапии стволовыми клетками пуповинной крови там, где данное лечение является законным…» Согласно источникам информации самой компании, их протоколы стволовых клеток пуповинной крови применялись более 700 раз для лечения более 80 заболеваний, включая ТСМ. В прессе было опубликовано большое количество негативных материалов по вопросам происхождения клеток и операций, проводимых АСТ.

По словам АСТ, терапевтическая эффективность их препаратов стволовых клеток была усилена при помощи ряда процедур. Во-первых, эритроциты и лейкоциты крови удаляются для снижения риска отторжения. Во-вторых, количество ключевых клеток CD133+ в пуповинной крови наращивается с нормального уровня 10% до 70-80%. Клетки CD133+ , также как стандартные клетки CD34+, считаются особенно действенными стволовыми клетками, благодаря их способности настраиваться на целевую ткань, дифференцироваться и приживаться. В-третьих, АСТ разработали процедуры для дифференциации стволовых клеток пуповинной крови на более специализированные виды, такие как, нейрональные стволовые клетки для регенерации спинного и головного мозга, или панкреатические стволовые клетки для лечения диабета. Кроме того, предположительно, компания разработала технологии замораживания клеток, которые усиливают жизнеспособность клеток после размораживания.

Компания АСТ сообщила о лечении восьми пациентов с хронической ТСМ препаратами стволовых клеток, полученных из пуповинной крови. Возраст пациентов варьировался от 18 до 43; у пяти была тетраплегия, у троих – параплегия; повреждения в основном были неполными. Пациентам внутривенно и/или подкожно вводилось около 1,5 миллионов стволовых клеток. После относительно недолгого периода наблюдения, большинство пациентов отмечали некоторые функциональные улучшения, включая улучшение чувствительности, способности ходить и улучшения функций дефекации и мочеиспускания.

TOP